变改通

肝脏表达抗菌肽2（LEAP2号）在鱼先天免疫系统中起着重要作用。本研究通过RACE技术获得俄罗斯鲟LEAP-2（Acipenser Gueldensaedti，LEAP－2，AgLEAP-2）的全长cDNA序列，并分析其序列特征和表达水平。AgLEAP－2原核表达载体被建造，重组蛋白被净化。此外，琼脂稀释法被用来初步检测AgLEAP－2蛋白的抗菌活性。结果表明，AgLEAP－2基因-cDNA的总长度为622bp，开放阅读框（开放阅读框，ORF）的总长度为246bp。据预测，它编码81个氨基酸，分子量约为11.2kDa，184个bp在5'非编码区，192个BP在3'非编码区。AgLEAP－2含有一个信号肽（1～25aa）和一个成熟肽（26～81aa）。成熟肽包含四个保守的半胱氨酸残基，在Cys、58－Cys69和Cys64-cys74的相对位置之间形成二硫键核心结构。实时荧光定量PCR（qRT－、PCR）的研究表明，AgLEAP－2在所有健康组织中的表达水平最高，其次是肠道和肌肉，鳃中的表达水平最低。与0小时相比，AgLEAP－2在嗜水气单胞菌（Aeromonas　hydrophila）感染后不同时间点的肝脏、脾脏、肠道、头肾、鳃和血液中的表达显著上调。此外，重组AgLEAP－2（rAgLEAP－2）蛋白在体外对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具有抗菌活性，并具有剂量效应。这项研究表明，AgLEAP－2可能在俄罗斯鲟鱼先天免疫系统中发挥重要作用，并对多种病原体具有一定的抗菌作用。本研究为新型抗菌剂的开发提供了依据。